平板划线法没有较好地得到单菌落的原因可能是操作不当。在平板划线实验中，要严格按照操作规程和方法进行，否则很难得到理想的结果。例如，选用平整、圆滑的接种环，按无菌操作法挑取少量菌种，或用移液管吸取少量菌液。拿接种环先在培养基一侧划3—4条连续的平行线(线条多少应依挑菌量的多少面定)。划完后应立即烧掉环上的残菌，以免因菌过多而影响后面各区的分离效果。或用移液管向培养基近边缘处的表面滴入一滴（不高于0.1ml）菌液，再用接种环按上面的方法以菌液为起始点划线。平板转动一个方向，用接种环从上次划线的末端开始，向另一方向划3－4条。