目的基因转入大肠杆菌的方法
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目的基因转入大肠杆菌的方法主要包括以下几个步骤:
1. 用限制性核酸内切酶(简称内切酶)切割所需要的外源基因(也称为目的基因),并提取出来。
2. 将大肠杆菌里的质粒提取出来,并用内切酶切割出切割点。
3. 使用DNA连接酶将目的基因和质粒连接形成重组质粒。
4. 将重组质粒导入大肠杆菌中。
5. 在一段时间过后随机提取出质粒检测,看外源基因是否已经开始在大肠杆菌中复制。
具体操作过程中,构建基因表达载体时,需要用限制酶切割含有目的基因的外源DNA分子和质粒,再用DNA连接酶将目的基因和质粒连接形成重组质粒。然后与大肠杆菌感受态细胞混合,将混合物接种在含有氨苄青霉素平板培养基上培养,以筛选含有重组质粒的大肠杆菌。
参考来源
[1]目的基因导入大肠杆菌的方法
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